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怎么處理牛血清白蛋白的常見問題
2020-03-25 牛血清白蛋白一般做為穩定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應液中，因為有些酶在低濃度下不穩定或活性低。加入牛血清白蛋白后，它可能起到保護或載體作用，不少酶類添加牛血清白蛋白后能使其活性大幅度提高。對多數底物牛血清白蛋白而言，牛血清白蛋白可以使酶切更*，并可實現重復切割。在37℃，酶切反應超過1h時，牛血清白蛋白可以使酶更加穩定，因為在不含牛血清白蛋白的反應緩沖液中，許多限制性內切酶在37℃下只能存活10"20min甚至更短的時間。而BSA可以結合緩沖液或底物DNA中抑制限...
蛋白酶K具有廣泛的底物特異性
2019-12-27 蛋白酶K具有廣泛的底物特異性。即便存在洗滌劑的情況下，其仍可降解許多非變性狀態的蛋白質。蛋白酶K分離自一種可在角質上生長的真菌白色側齒霉菌(Engyodontiumalbum)（前稱腐生真菌(Tritirachiumalbum)。因此，蛋白酶K能夠降解非變性狀態的角質（頭發），因而稱為“蛋白酶K”。1其切割的主要位點為帶有封閉氨基基團、鄰近脂族或芳香族氨基酸羧基端的肽鍵。因其廣泛的特異性，其較為常用。蛋白酶K（ProteinaseK），相對分子量約為29.3kDa,是一種切割...
如何提取外泌體？都有哪些方法？
2019-11-26 外泌體是指包含了復雜RNA和蛋白質的小膜泡(30-150nm)，現今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年，外泌體于綿羊網織紅細胞中被發現，1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體，經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。所有培養的細胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關他們分泌和攝取及其組成、“運載...
如何解決胎牛血清使用中遇到的問題？
2019-11-15 如何儲存和解凍胎牛血清才不會使產品質量受損?將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規則地搖晃均勻。長時間儲存在2-8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲存血清，并避免反復凍融。我們建議血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時，請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內，再放回冷凍。按如下操作可避免沉...
PicoGreen熒光染料可對DNA樣品進行定量
2019-09-10 PicoGreen熒光染料法是一種靈敏的雙鏈DNA檢測方式，通過Modulus檢測儀可以檢測到pg級的微量DNA。這種方法主要用來測定微量的DNA殘留，或對DNA樣品進行定量。作為DNA染色劑之一的PicoGreen熒光染料特異性地與樣品中雙鏈DNA結合，產生熒光信號。PicoGreen技術可以檢測到低達0.5納克雙鏈DNA的變化。DNA的微量增加引起熒光信號強度或相對熒光單位（RFU）的顯著增加。其自發熒光忽略不計，重復性標準差異低，不受樣品化學成分的干擾。Picogree...
擦亮眼睛：選購胎牛血清要注意這些問題
2019-04-22 市場上的胎牛血清種類繁多，魚龍混雜，很多科研工作者，特別是剛接觸細胞培養的人，難以分辨胎牛血清質量的優劣。選購胎牛血清請注意以下幾點：一、外觀拿到胎牛血清，先接觸的是血清外觀，對于缺少細胞培養經驗的人來說，外觀的判斷尤為重要1、顏色根據血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現出黃色或紅色，我國的細胞培養用血清標準是不高于20mg/dl，實際上，血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響，這個指標的意義在于能體現出采血過程的嚴謹規范程度，良好的操作能降低血清的溶血。國產血清的采血點很分散，...
外泌體可以來了解一下
2018-12-07 外泌體的提取主要包括以下幾種方式，一是超速離心法，這是目前外泌體提取常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時發現外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統一的鑒定標準，也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心，這種操作簡單、省時，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準備工作繁雜，耗時，量少。四是免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態的完整，特異性高、操作簡單、不...
EZ ECL Femto化學發光液（飛克級）
2018-11-13 使用方法1)取出印記膜，加入合適的封閉液在溫室下孵育20-60分鐘，同時振蕩，以封閉膜上非特異性蛋白結合位點。2)將膜從封閉液中取出，與一抗工作液在溫室孵育1小時，同時振蕩；或在28℃孵育過夜，不振蕩。3)將足量的洗滌緩沖液加至膜上，保證緩沖液將膜*覆蓋。振蕩孵育≥5分鐘，更換洗滌緩沖液并重復該步驟4-6次。增加洗滌緩沖液體積，洗滌次數和洗滌時間有助于降低背景信號。注：1）孵育前，膜在洗滌緩沖液中的短暫淋洗會提高洗滌效率；2）按前文建議的HRP標記二抗稀釋度非常重要的。4)將...

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