SmartCell溶酶體染色試劑盒*Orange*產(chǎn)品描述

     溶酶體是細(xì)胞內(nèi)具有單層膜囊狀結(jié)構(gòu)的細(xì)胞器，溶酶體被比喻為細(xì)胞內(nèi)的“酶?jìng)}庫(kù)"或“消化系統(tǒng)"，溶酶體內(nèi)含有許多種水解酶類(lèi)，能夠?qū)⒓?xì)胞吞噬進(jìn)的食物或致病菌等大顆粒物質(zhì)消化成生物大分子，殘?jiān)ㄟ^(guò)外排作用排出細(xì)胞，分解很多種物質(zhì)，也能在細(xì)胞分化過(guò)程中，將陷入溶酶體內(nèi)的某些衰老細(xì)胞器和生物大分子消化。溶酶體膜內(nèi)pH值約4.5-4.8，使得消化酶類(lèi)可以在酸性條件下工作，溶酶體外的胞質(zhì)內(nèi)，pH值為7.2左右，溶酶體膜通過(guò)從胞質(zhì)泵入H+維持溶酶體內(nèi)外這種pH差異。

   Smart Cell溶酶體染色 試劑盒*Orange*可以標(biāo)記活細(xì)胞中的溶酶體，使之帶橙色熒光(Ex/Em =542/556 nm)。本試劑盒使用染料為一種疏水性復(fù)合物，屬趨溶酶體染料，染料滲透進(jìn)入完整的活細(xì)胞中，有選擇性進(jìn)入溶酶體，并因溶酶體膜內(nèi)外的不同pH環(huán)境而被鎖定在溶酶體中。染料一旦進(jìn)入溶酶體中，熒光顯著性增強(qiáng)并非常穩(wěn)定。基于這一特點(diǎn)，本試劑盒可以用于酶標(biāo)版、免疫組化和流式細(xì)胞技術(shù)等應(yīng)用，用于多種不同類(lèi)型的研究中，包括細(xì)胞粘附性、趨化性、多藥物抗性、細(xì)胞活性、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞毒性的研究，適用于增殖型和非增殖型細(xì)胞，也可以用于懸浮和貼壁細(xì)胞。

     Smart Cell溶酶體染色試劑盒是Life-iLab公司專(zhuān)門(mén)研發(fā)的一類(lèi)熒光成像工具，試劑盒設(shè)計(jì)嚴(yán)謹(jǐn)，需人為手動(dòng)操作的步驟很少。可用來(lái)標(biāo)記細(xì)胞器、亞細(xì)胞等結(jié)構(gòu)，例如細(xì)胞膜、溶酶體、溶酶體和細(xì)胞核等。Smart Cell溶酶體染色試劑盒提供了標(biāo)記溶酶體的全套試劑，針對(duì)每種細(xì)胞結(jié)構(gòu)都能提供藍(lán)色/綠色/紅色/橙色等不同熒光供選擇，既可單獨(dú)使用，也支持對(duì)細(xì)胞的多重?zé)晒夥治?/span>。這種高效的細(xì)胞標(biāo)簽為從空間上和時(shí)間上研究發(fā)生的細(xì)胞活動(dòng)提供了一種十分有效的方法。

SmartCell溶酶體染色試劑盒*Orange*試劑盒組分

使用方法

1. 準(zhǔn)備溶酶體染色液

1.1 室溫避光放置5-10分鐘，預(yù)熱LysoBrite Orange染料(Component A)。

1.2 取20µL預(yù)熱好的LysoBrite Orange染料(Component A)，用10 mL活細(xì)胞染色緩沖液(Component B)進(jìn)行稀釋。

注意：1) 20μL LysoBrite Orange染料(Component A)足夠完成1塊96孔板實(shí)驗(yàn)，剩余的LysoBrite Orange染料(Component A) 可以根據(jù)需要分裝避光保存于-20℃，避免反復(fù)凍融。2)染料濃度根據(jù)具體應(yīng)用會(huì)有不同，染色條件根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型、細(xì)胞或組織的染料滲透性不同可以進(jìn)行調(diào)整優(yōu)化。

2. 細(xì)胞染色

2.1 貼壁細(xì)胞：在96孔板（100μL）或培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到70-80%融合度，在96孔板或培養(yǎng)皿內(nèi)添加等體積的染色工作液(步驟1.2)，在37°C, 5% CO2條件下培養(yǎng)細(xì)胞30分鐘-2小時(shí)。用 TRITC濾光片在顯微鏡下進(jìn)行熒光觀察。

注意：如果細(xì)胞沒(méi)有充分染色，可以適當(dāng)增加染料濃度或增加染色時(shí)間進(jìn)行改善

2.2 懸浮細(xì)胞: 在1000 rpm 條件下離心細(xì)胞培養(yǎng)液5分鐘，棄去上清，用預(yù)熱好的細(xì)胞培養(yǎng)液溫和的重懸細(xì)胞，然后添加等體積的染色工作液(步驟1.2)，在37°C, 5% CO2條件下培養(yǎng)細(xì)胞30分鐘-2小時(shí)。用 TRITC濾光片在顯微鏡下進(jìn)行熒光觀察。

圖1：U2OS 細(xì)胞用SmartCell溶酶體染色 試劑盒*Orange*染色后進(jìn)行成像分析

                      （所用96孔板為Costar black）