溶酶體染色試劑盒通常勻化次數(shù)為20至40下（或細(xì)胞顆粒群/組織塊狀消失為止）達(dá)到80％的細(xì)胞裂解為理想狀態(tài)，但不同的組織或細(xì)胞類型會(huì)存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升勻漿物的細(xì)胞裂解程度，完整細(xì)胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)，低于50％可以增加勻化次數(shù)。通常孵育5分鐘（不宜超過5分鐘）達(dá)到80％的細(xì)胞裂解為理想狀態(tài)，但不同的組織或細(xì)胞類型會(huì)存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升裂解物的細(xì)胞裂解程度，完整細(xì)胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)。低于50％可以增加孵育時(shí)間和渦旋震蕩次數(shù)。
溶酶體染色試劑盒可將胞內(nèi)廢物、脂質(zhì)、碳水化合物、蛋白質(zhì)及其他大分子等物質(zhì)分解為小分子化合物。正常的溶酶體功能使細(xì)胞能有效的動(dòng)員和循環(huán)利用細(xì)胞組分，但也能阻止受損細(xì)胞器、錯(cuò)誤折疊蛋白質(zhì)及入侵病原物的積累。雖然溶酶體存在于所有動(dòng)物細(xì)胞中，但在抗病細(xì)胞如淋巴細(xì)胞中豐度高。溶酶體含有約50種不同的降解酶，所有水解酶在pH5左右活性，但其周圍胞質(zhì)中pH為7.2。溶酶體膜內(nèi)含有一種特殊的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，可以利用ATP水解的能量將胞質(zhì)中的H+泵入溶酶體，以維持其pH5。這些酶協(xié)同作用，以維持蛋白和細(xì)胞器的穩(wěn)態(tài)。若溶酶體內(nèi)的這些酶發(fā)生異常則會(huì)導(dǎo)致多種疾病的產(chǎn)生，這些酶如組織蛋白酶D的表達(dá)水平顯著降低。上調(diào)表達(dá)溶酶體基因的水平，正探索作為治療神經(jīng)退行性疾病如帕金森癥的一種潛在的治療途徑。
統(tǒng)計(jì)學(xué)分析所得計(jì)量數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示采用SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，兩樣本均數(shù)的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),p<0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。每組實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)3次。結(jié)果2.1 Lysotracker Red染色觀察CREG對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞溶酶體發(fā)生數(shù)量的影響不同實(shí)驗(yàn)組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞Lysotracker Red染色結(jié)果顯示，與C57小鼠相比，CREG+/-雜合子小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中l(wèi)ysotracker紅色熒光強(qiáng)度明顯減少。而與CREG+/-雜合子小鼠相比，微量滲透泵以30μg/kg/d皮下給予重組CREG蛋白的CREG+/-雜合子小鼠腹腔巨噬細(xì)胞lysotracker紅色熒光強(qiáng)度明顯增加。
更新時(shí)間：2018-08-09
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