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培養細胞如何選擇適合自己實驗的血清?快點擊進來看看吧!

更新時間:2017-02-22點擊次數:3978

培養細胞如何選擇適合自己實驗的血清?快點擊進來看看吧!

血清(Serum)即血液凝固析出的淡黃色透明液體

    將血液自血管內抽出,放入試管中,不加抗凝劑,則凝血反應被激活,血液迅速凝固,形成膠凍。在凝血過程中,纖維蛋白原轉變成纖維蛋白塊,血清中無纖維蛋白原,這一點是與血漿zui大的區別。在凝血反應中,血小板釋放出許多物質,各凝血因子也都發生了變化。這些成分都留在血清中并繼續發生變化,如凝血酶原變成凝血酶,并隨血清存放時間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區別之處。但大量未參加凝血反應的物質則與血漿基本相同。為避免抗凝劑的干擾,血液中許多化學成分的分析,都以血清為樣品。 

血漿(Plasma)相當于結締組織的細胞間質,是血液的重要組成部分,呈淡黃色液體(因含有膽紅素)
    在血漿的化學成分中,水分占90~92%,溶質以血漿蛋白為主。血漿蛋白是多種蛋白質的總稱,用鹽析法可將其分為白蛋白、球蛋白和纖維蛋白原三類。

    血漿蛋白質的功能有:維持血漿膠體滲透壓;組成血液緩沖體系,參與維持血液酸堿平衡;運輸營養和代謝物質,血漿蛋白質為親水膠體,許多難溶于水的物質與其結合變為易溶于水的物質;營養功能,血漿蛋白分解產生的氨基酸,可用于合成組織蛋白質或氧化分解供應能量;參與凝血和免疫作用。

天然培養基

   培養基的主要成份中動物血清對細胞的生長繁殖發揮著重要甚至是難以替代的作用.在動物血清的應用中牛血清又是的,所以血清是醫藥生物技術產品中重要的原材料之一。保證血清質量也是促進生物制品質量提高的重要環節。

血 清 種 類

    目前用于組織培養的血清主要是牛血清,培養某些特殊細胞也用人血清、馬血清等。選擇用牛血清培養細胞的原因:來源充足、制備技術成熟、經過長時間的應用考驗人們對其有比較深入的理解。牛血清對絕大多數哺乳動物細胞都是適合的,但并不排除在培養某種細胞時使用其他動物血清更合適。牛血清是細胞培養中用量zui大的天然培養基,含有豐富的細胞生長必須的營養成份,具有極為重要的功能。牛血清分為小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清應取自剖腹產的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然,胎牛血清是品質zui高的,因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分zui少。

血清的主要成分

    血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚。對血清的成分和作用的研究雖有很大進展,但仍存在一些問題。主要是:

*:血清的成份可能有幾百種之多,目前對其準確的成份、含量及其作用機制仍不清楚,尤其是對其中一些多肽類生長因子、激素和脂類等尚未充分認識,這給研究工作帶來許多困難。

第二:血清都是批量生產,各批量之間差異很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保證每批血清的相似性極為困難。從而使實驗的標準化和連續性受到限制。

第三:不能排除血清中含有易變物質,這被認為是“瓶中惡化”的原因之一。

血清的主要作用

    提供基本營養物質:氨基酸、維生素、無機物、脂類物質、核酸衍生物等,是細胞生長必須的物質;

    提供激素和各種生長因子:胰島素、腎上腺皮質激素、類固醇激素(雌二醇、睪酮、孕酮)等.生長因子如成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等;

    提供結合蛋白:結合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質,如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等,轉鐵蛋白攜帶鐵.結合蛋白在細胞代謝過程中起重要作用;

    提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷; 對培養中的細胞起到某些保護作用:有一些細胞,如內皮細胞、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。這種作用是偶然發現的,現在則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因為胰蛋白酶已經被廣泛用于貼壁細胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度,可以保護細胞免受機械損傷,特別是在懸浮培養攪拌時,粘度起到重要作用。血清還含有一些微量元素和離子,他們在代謝解毒中起重要作用,如SeO3,硒等。

使用血清的缺點

    血清成分復雜,雖含許多對細胞有利成分,也含有對細胞有害的成分,使血清有幾個明顯的缺點:

*、對大多數細胞,在體內狀態,血清不是它們接觸的生理學液體,只是在損傷愈合以及血液凝固過程中才接觸血清,因此使用血清有可能改變某種細胞在體內的正常狀態,血清可能促進某些細胞的生長(成纖維細胞)同時抑制另一類細胞生長(表皮細胞);

第二、血清含一些對細胞產生毒性的物質,如多胺氧化酶,能與來自高度繁殖細胞的多胺反應(如精胺、亞精胺)形成有細胞毒性作用的聚精胺。補體、抗體、細菌毒素等都會影響細胞生長,甚至造成細胞死亡;動物個體不同,血清產地、批號不同,每批質量差異甚大,其成分不能保持一致;

第三、取材中可能帶入支原體、病毒,對細胞產生潛在影響,可能導致實驗失敗或實驗結果不可靠性;血清的使用使得實驗和生產的標準化困難,其中的蛋白質使得某些轉基因蛋白生物藥品生產中分離純化工作很難完成;

第四、 大規模生產中,血清來源越來越困難,價格昂貴,是構成動物細胞培養對生產成本的主要部分之一。

    盡管在細胞培養中存在一些不確定的因素,但血清仍然是細胞培養液中zui基本的添加物,尤其是在原代培養或細胞生長狀態不良時,常常會先使用有血清的培養液進行培養,待細胞生長旺盛后再換成無血清培養液。

相信品牌,但不能迷信品牌 

    Hyclone, Gibico, Biowest, Life-iLab, BI, Gemini等品牌血源均為國外(澳洲或南美)用戶相對較多,可信度較高。但由于血清產品的特殊性,批次間差異較大,同一品牌不同批次的選擇非常重要。有經驗的用戶,往往對批次好的產品大量采購備用。Gibico, Hyclone等產量zui大,覆蓋范圍zui廣。Life-iLab胎牛血清在批次的控制方面做得,穩定性好,在工業客戶中使用量較高。

驗證

    沒有一種血清可以滿足所有細胞生長所需,在換血清品牌,或者同一品牌換批次時都要做好驗證工作,相對來講批次間差距越小越好,不為品牌,不為價格,只買對的。

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